24 Марта 2010

-И-

Иммунная система организма - совокупность лимфоидных органов и тканей, которые определяют контроль за антигенным постоянством внутренней среды организма.

ИММУНИЗАЦИЯ - специфическая профилактика инфекций. При активной иммунизации (вакцинации) в организм человека или животного вводится антиген (возбудитель заболевания), чтобы организм сам выработал антитела. При пассивной иммунизации в организм вводятся готовые антитела (искусственно созданные или взятые у другого организма).

ИММУНИТЕТ - невосприимчивость организма к инфекционным и неинфекционным агентам и веществам: бактериям, вирусам, ядам и другим продуктам, чужеродным для организма. Различают врожденный и приобретенный иммунитет. Врожденный иммунитет передается по наследству, как и другие генетические признаки. Приобретенный иммунитет (он может быть активно или пассивно приобретенным) возникает в результате перенесенной болезни или вакцинации и по наследству не передается.

ИММУННЫЙ ОТВЕТ - действия иммунной системы в ответ на вторжение чужеродных веществ.

ИММУНОБЛОТ - метод лабораторного исследования сыворотки крови на присутствие антител к ВИЧ; это более точный анализ, чем ИФА, и используется для подтверждения результатов ИФА.

Иммуноглобулин - способ предотвращения инфекционных заболеваний, основанный на создании пассивного иммунитета на период повышенного риска инфицирования. Проводится посредством введения в организм препаратов иммуноглобулина, содержащего антитела. Длительность создаваемого иммунитета зависит от концентрации антител в препарате и их стабильности; в среднем период полураспада пассивно введенных гомологичных антител составляет 35-40 дней. Повторные введения иммуноглобулина допускаются лишь в исключительно неблагополучных ситуациях: из-за выработки антииммуноглобулиновых антител эффективность дробной пассивной иммунизации значительно ниже, чем одномоментной.

В тактике иммуноглобулино-профилактики различают два вида действий:

1) введение иммуноглобулина до вероятного контакта с возбудителем (pre-exposure), например, при выезде иммунизированного лица в эндемичный по данной инфекции район;

2) введение иммуноглобулина после вероятного контакта с возбудителем (postexposure), возможно даже в стадии инкубации, например, в детском учреждении после выявления случая(ев) инфекционного заболевания и изоляции его источника.

По понятным причинам эффективность профилактики в первой ситуации будет выше, чем во второй при прочих равных условиях. Иммуно-(гамма-) глобулинопрофилактика достаточно широко применялась как средство борьбы с гепатитом А. Сведения о ее эффективности противоречивы, что объясняется, очевидно, разнообразием эпидемических ситуаций и нестандартностью используемых препаратов в отношении содержания антител. Были рекомендованы массовые введения иммуноглобулина в период, предшествующий ожидаемому подъему заболеваемости (т.н. предсезонная профилактика) и небольшие по масштабам прививки в детских коллективах, в которых регистрировались случаи желтухи (т.н. профилактика по показаниям). В настоящее время показания к применению иммуноглобулина для профилактики гепатита А резко ограничены. При всех обстоятельствах профилактика гепатита А с помощью иммуноглобулина не оказывала влияния на эпидемический процесс, т.е. распространение инфекции на данной территории, хотя и предотвращала развитие желтушных форм у своевременно привитых лиц.

При гепатите В профилактические введения специфического иммуноглобулина с высоким содержанием антител к поверхностному антигену вируса, анти-HBs рекомендуется делать новорожденным, матери которых перенесли это заболевание в течение беременности или являются хроническими носителями HBs - антигена , поскольку в данных случаях вероятность инфицирования ребенка очень высока. Специфический анти-HBs иммуноглобулин применяется также для предотвращения заболевания у персонала больниц, станций переливания крови и научных лабораторий после травматического повреждения кожи или слизистых, имевших место при работе с кровью человека.    Тактика иммуноглобулино-профилактики при гепатитах C, D и Е пока не разработана.   (Источник - http://www.gepatitunet.ru).

Иммуноглобулин IgA - сывороточный IgA составляет 15-20 % всей фракции иммуноглобулинов, при этом 80 % молекул IgA представлено в мономерной форме у человека. Секреторный IgA представлен в димерной форме в комплексе секреторным компонентом, содержится в серозно-слизистых секретах (например в слюне, молозиве, молоке, отделяемом слизистой оболочки мочеполовой и респираторной системы).

Иммуноглобулин IgD - составляет менее одного процента фракции иммуноглобулинов плазмы, содержится в основном на мембране некоторых В-лимфоцитов. Функции до конца не выяснены, предположительно является антигенным рецептором для В-лимфоцитов, еще не представлявшихся антигену.

Иммуноглобулин IgE- связан с мембранами базофиллов и тучных клеток, в свободном виде в плазме почти отсутствует. Связан с аллергическими реакциями.

Иммуноглобулин IgG - является основным иммуноглобулином сыворотки здорового человека (составляет 70-75 % всей фракции иммуноглобулинов), наиболее активен во вторичном иммунном ответе и антитоксическом иммунитете. Благодаря малым размерам (коэффициент седиментации 7S, молекулярная масса 146 кДа) является единственной фракцией иммуноглобулинов, способной к транспорту через плацентарный барьер и тем самым обеспечивая иммунитет плода и новорожденного.

Иммуноглобулин IgM - представляют собой пентамер основной четырехцепочечной единицы, содержащей две ?- цепи. Появляются при первичном иммунном ответе на неизвестный антиген, составляют до 10 % фракции иммуноглобулинов. Являются наиболее крупными иммуноглобулинами (970 кДа).

ИММУНОДЕФИЦИТ - неспособность некоторых звеньев иммунной системы нормально функционировать, в результате чего снижается сопротивляемость организма человека к инфекционным агентам и повышается вероятность развития различных заболеваний, которым в ином случае пациент не был бы подвержен (см. оппортунистические инфекции). При заболеваниях, связанных с ВИЧ, разрушается клеточный иммунитет, связанный с функцией Т-лимфоцитов-помощников.

ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ - модуляторы иммунного ответа - природные или синтезированные вещества, которые стимулируют, направляют или восстанавливают нормальный иммунный ответ. К таким веществам относятся интерфероны, интерлейкины, гормоны вилочковой железы и моноклонные антитела.

ИММУНОСТИМУЛЯЦИЯ - иммуномодуляция, иммунотерапия - метод лечения, который заключается в восстановлении или укреплении поврежденной иммунной системы.

ИММУНОСУПРЕССИЯ - подавление деятельности одного или нескольких компонентов иммунной системы организма. ВИЧ-инфекция вызывает иммуносупрессию и другие нарушения иммунитета.

Иммуноферментный анализ (ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) - лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антигенов и антител. В основе метода иммуноферментного анализа (ИФА) лежит принцип специфического взаимодействия между антигеном и соответствующим ему антителом. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием так называемого конъюгата, который представляет собой анти-антитело, соединённое с ферментной меткой (обычно используют пероксидазу хрена либо другие пероксидазы).

Конъюгат может быть получен с использованием поликлональных антивидовых антител (например, кроличьи антитела против иммуноглобулинов человека) или моноклональных антител, направленных против человеческих иммуноглобулинов определённого класса (M, G, А).

В зависимости от того, какие антитела использованы, тест-система будет выявлять в исследуемом образце или специфические антитела независимо от их класса, или антитела лишь определённого класса (например, только иммуноглобулин G или только иммуноглобулин M).

Существует несколько методов постановки реакции, однако в настоящее время наиболее часто для выявления специфических антител используются следующая схема (т.н. сэндвич-метод ИФА):

На лунках тест-планшета зафиксирован антиген возбудителя, который инкубируется с испытуемой сывороткой или плазмой крови. При наличии в них специфических антител происходит связывание их с образованием комплекса антиген-антитело.

В дальнейшем, при инкубации этого комплекса с конъюгатом, происходит присоединение анти-антител к имеющимся комплексам антиген-антитело. Ферментативная реакция (цветная реакция) проходит в присутствии перекиси водорода и субстрата, представленного неокрашенным соединением, которое в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Интенсивность окрашивания зависит от количества выявленных специфических антител.

Результат оценивается спектрофотометрически или визуально. По такому принципу построена большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.

Вышеперечисленные преимущества определили широкое применение ИФА во всех областях медицины, в том числе и при диагностике, профилактике и изучении вирусных гепатитов . Диагностические препараты для ИФА, предназначенные для выявления большинства серологических маркеров инфицирования вирусами гепатитов А, В, С и D выпускаются различными предприятиями и фирмами как у нас в стране, так и за рубежом.

В качестве твердой фазы в большинстве коммерческих диагностических препаратов используют полистироловые 96-ти луночные планшеты или полистироловые шарики [фирмы “ДИА-плюс”, “Рош” (“ROCHE”), “ЭББОТТ” (“АВВОТТ”)]. Основные требования, предъявляемые к твердой фазе при проведении ИФА, включают: устойчивость к растворам, используемым в реакции;

Наличие высокой специфической емкости, т.е. способности сорбировать на своей поверхности антитела или антигены в количествах, необходимых для проведения реакции в сочетании с как можно меньшей неспецифической сорбцией белков из исследуемых образцов и коньюгатов.

Наиболее распространенным способом иммобилизации антител или антигенов является адсорбция, когда часть молекул за счет ионных и гидрофобных взаимодействий, а также образования водородных связей присоединяется к поверхности твердой фазы.

В настоящее время разработаны различные варианты твердофазного иммуноферментного анализа, и практически все они были апробированы или применены для выявления маркеров инфицирования вирусами гепатитов А, В, С, D и Е. Наиболее простой схемой проведения ИФА является “сэндвич”-метод. Общая схема проведения метода заключается в следующем. На твердой фазе адсорбированы антитела к исследуемому антигену После инкубации исследуемого материала и образования комплекса антитело — антиген проводится удаление несвязавшихся компонентов, добавляется коньюгат, т.е. антитела к искомому антигену, меченые ферментом. По завершении инкубации с последующим удалением непрореагировавшего коньюгата промывкой образуется комплекс, в котором антиген как бы заключен между двумя слоями антител. Наличие меченных ферментом антител определяется при помощи соответствующего субстрата. “Сэндвич”-метод используется для выявления HBsAg, HBeAg, антигена вируса гепатита А. Для ускорения “сэндвич”-метода, применяется его модификация — “одностадийный сэндвич-метод”, при которой добавление исследуемого материала и коньюгата проводится одновременно. Так, для выявления HBsAg фирма “ДИАплюс” предлагает эту схему проведения реакции. При использовании диагностических наборов ИФА, основанных на этой схеме проведения реакции, необходимо помнить, что в исследуемом образце не должно быть веществ, ингибирующих активность фермента, т. н. ферментных ядов, (например, азида натрия, применяемого в качестве консерванта). Одной из особенностей этого метода является снижение оптической плотности ферментативной реакции с образцами, имеющими крайне высокую концентрацию исследуемого антигена за счет образования комплекса HBsAg и коньюгата в растворе. Однако тщательный подбор концентрации меченых антител в коньюгате представляемого диагностического набора устраняет возможность получения ложнонегативных результатов с образцами, имеющими высокую концентрацию HBsAg.

Для выявления антител к различным антигенам вирусов гепатитов А, В, С и D применяются разнообразные варианты постановки ИФА, основными из которых являются:

1. Метод с использованием меченых вторичных антител (антител против иммуноглобулинов человека) и иммобилизированных антигенов на твердой фазе. Метод применяется для определения антител к вирусу гепатита С. Общая схема проведения реакции заключается в следующем (рис. 21): на твердой фазе иммобилизуют антиген, после инкубации исследуемого материала и удаления несвязавшихся компонентов добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам человека класса IgG, которые взаимодействуют с Fc-фрагментом анти-ВГС. После проведения субстрат-ферментативной реакции проводят учет полученных результатов. При наличии антител уровень оптической плотности прошедшей реакции превосходит показатели отрицательных образцов. Для уменьшения возможных неспецифических реакций вводится специальный коэффициент, указанный в наставлениях, прилагаемых к диагностическим наборам.
2. Метод с использованием меченого антигена и иммобилизованного на твердой фазе антигена. Метод используется для выявления анти-HBs в диагностическом наборе “AUSAB” EIA фирмы “ЭББОТТ”. Общая схема проведения реакции заключается в следующем (рис. 22): на полистироловом шарике адсорбирован HBsAg субтипа ad и ау, после инкубации с исследуемым материалом и удаления непрореагировавших компонентов добавляется HBsAg, меченный ферментом, который взамодействует со свободными центрами связывания антител к HBsAg, провзаимодействовавшими с антигеном, сорбированным на твердой фазе. При наличии антител в исследуемой пробе уровень оптической плотности прошедшей реакции превосходит показатели отрицательных контрольных образцов.
3. Метод с использованием меченых и иммобилизованных антител, а также стандартного антигена. Этот вариант метода применяют для выявления анти-HBs и анти-НВе с диагностикумами фирмы (“ДИАплюс”). Общая схема проведения реакции заключается в следующем (рис. 23 ): на первом этапе реакции исследуемый образец смешивают с раствором, содержащим фиксированное количество антигена. После завершения инкубации добавляют шарик с сорбированными на нем антителами и коньюгат. После удаления непрореагировавших компонентов реакции проводится ферментативная реакция, интенсивность которой обратно пропорциональна содержанию исследуемых антител в образце. Вариантом этой схемы может служить определение анти-НВе и анти-дельта с диагностикумами фирмы “ЭББОТТ”, когда компоненты реакции добавляются последовательно.
4. Метод с использованием меченых антител и иммобилизованного антигена (конкурентный метод). Данная схема широко применяется для выявления анти-HBs, анти-НВс и анти-ВГА. Общая схема проведения реакции заключается в следующем (рис. 24): к антигену, иммобилизованному на твердой фазе одновременно добавляют исследуемый материал и коньюгат. При проведении реакции меченые и исследуемые антитела конкурируют за активные центры антигена, иммобилизованного на твердой фазе. После завершения инкубации и удаления не прореагировавших компонентов проводится ферментативная реакция, результаты которой обратно пропорциональны количеству антител в исследуемом образце. При использовании набора фирмы (“ДИАплюс”) при выявлении анти-HBs, в случае наличия HBsAg уровень ферментативной реакции будет превосходить результаты реакции в негативных образцах, что позволяет косвенно судить о наличии антигена.
5. Метод выявления антител класса IgM - многослойный “сэндвич” метод. Этот метод применяется для выявления анти-НВс IgM и анти-ВГА IgM. Общая схема проведения реакции заключается в следующем (рис. 25): на твердой фазе адсорбированы антитела к мю-цепям иммуноглобулинов класса М, которые взаимодействуют с антителами класса IgM, находящимися в исследуемой сыворотке. После удаления непрореагировавших компонентов добавляется стандартное количество антигена, антитела против которого определяются. Удалив непрореагировавшие компоненты реакции, добавляют меченые антитела, реагирующие с антигеном. Также, как и в обычном “сэндвич”-методе, чем больше количество антител, тем интенсивней ферментативная реакция. Для уменьшения ложнопозитивных результатов исследование сывороток крови проводится после их разведения в 1000 раз.  (Источник - http://www.gepatitunet.ru).

Вышеперечисленные схемы проведения реакций по определению антигенов и антител не исчерпывают всего многообразия вариантов проведения иммуноферментной реакции. Разработаны варианты ИФА с использованием авидин-биотиновой системы, систем усиления ферментативной реакции, проведения реакции на фильтрах и т. д.

Для ферментативной метки антигенов или антител могут быть применены разнообразные ферменты: пероксидаза хрена, щелочная фосфотаза, бета-галактозидаза и т. д. Во всех коммерческих тест-системах используется пероксидаза хрена, выбор которой определяется ее высокой удельной каталитической активностью, доступностью, стабильностью, простотой детекции. В качестве субстратного реагента наиболее часто применяется орто- фенилендиамин (ОФД) с перекисью водорода, продукт окисления которого регистрируется фотометрически. Для остановки ферментативной реакции применяют “стоп реагент”, который добавляют во все исследуемые и контрольные пробы в равных количествах. Наиболее часто в качестве “стоп реагента” применяют серную кислоту. Учет результатов проводят спектрофотометрически при длине волны 490 нм.

Одним из наиболее важных вопросов при проведении иммуноферментного теста является вопрос о специфичности результатов. Для подтверждения позитивных результатов при выявлении HBsAg применяется подтверждающий или конфирмационный тест . Четкое соблюдение всех параметров, указанных в наставлениях к диагностическим наборам для иммуноферментного анализа, позволяет избежать ложнопозитивных и ложнонегативных результатов, связанных с работой оператора.

ИН ВИВО (IN VIVO) - исследования, проводимые на живом организме, например, на человеке или на животных.

ИН ВИТРО (IN VITRO) - в пробирке - исследования или манипуляции, проводимые в специально созданной искусственной среде вне живого организма, в лабораторных условиях.

ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕАЗЫ - противовирусные лекарственные препараты, которые, воздействуя на протеазу - фермент, необходимый ВИЧ для размножения, - приводят к образованию неполноценных вирионов ВИЧ, неспособных инфицировать новые клетки.

ИНДИНАВИР - криксиван - ингибитор протеазы, выпускаемый фармацевтической компанией «Merck».

ИНСУЛИН - гормон, производимый клетками поджелудочной железы, позволяет организму усваивать глюкозу. При образовании недостаточного количества инсулина или снижении чувствительности к инсулину развивается сахарный диабет.

ИНТЕГРАЗА - фермент в составе ВИЧ, управляющий функцией вторжения генетического материала провируса ВИЧ в геном хозяина. Интеграза является мишенью для нового поколения противовирусных препаратов - ингибиторов интегразы.

ИНТЕГРАЦИЯ - процесс, благодаря которому различные части организма действуют как единое целое, главным образом за счет деятельности центральной нервной системы и гормонов. В отношении ВИЧ-инфекции, интеграцией называют процесс, в ходе которого вирусная ДНК приближается к ядру клетки хозяина и с помощью фермента интегразы встраивается в структуру ДНК хозяина. После этого вирусная ДНК уже называется провирусом и воспроизводится вместе с генами клетки-хозяина всякий раз, когда происходит деление клетки.

ИНТЕРЛЕЙКИН-2 (INTERLEUKIN-2, IL-2) - гормон, управляющий функцией Т-лимфоцитов. Интерлейкин-2, полученный с помощью генной инженерии, разрешен к применению для лечения метастатического рака почек. Испытывался в сочетании с АЗТ и другими антивирусными препаратами для лечения СПИДа; сообщаемые результаты противоречивы. В больших дозах очень токсичен. В малых дозах не токсичен и имеет иммуностимулирующее действие, в частности, повышает количество Т-лимфоцитов и активность "клеток-убийц".

ИНТЕРЛЕЙКИНЫ - вещества гормональной природы, выделяемые различными клетками иммунной системы и служащие химическими передатчиками сообщений.

Интерфероны (Interferons) – это  регуляторы межклеточных взаимодействий. Их существует 3 типа - a , b , g . Также интерфероны  - группа низкомолекулярных гликопротеидов, вырабатываемых клетками человека или животных в ответ па вирусную инфекцию или под действием различных индукторов (например, двухцепочечной РНК, инактивиро-ваннь1х вирусов и др.) и обладающих противовирусным действием. Интерфероны представлены тремя классами: альфа-лейкоцитарным, вырабатываемым ядерными клетками крови (гранулоцитами, лимфоцитами, моноцитами, малодифферинцированными клетками); бета-фибробластным - синтезируемым клетками кожно-мышечной, соединительной и лимфоидной ткани: гамма-иммунным — вырабатываемым Т- лимфоцитами в кооперации с макрофагами, естественными киллерами. Антивирусное действие происходит не непосредственно при взаимодействии интерфе-ронов с вирусом, а опосредованно через клеточные реакции. Ферменты и ингибиторы, синтез которых индуцирован интерфероном, блокируют начало трансляции чужеродной генетической информации, разрушают молекулы информационных РНК. Взаимодействуя с клетками иммунной системы, стимулируют фагоцитоз, активность естественных киллеров, экспрессию главного комплекса гистосовместимости . Непосредственно воздействуя на В-клетки, интерферон регулирует процесс антителообразования.

При вирусных гепатитах система интерферона ведет себя по-разному. Считается, что вирус гепатита В является слабым индуктором интерферона. В отличии от большинства вирусных инфекций, при которых в остром периоде повышается уровень эндогенного интерферона, при острых гепатитах В и D происходит угнетение продукции эндогенного интерферона, уменьшение способности лейкоцитов или лимфоцитов продуцировать альфа- и гамма-интерфероны. Зарегистрирована корреляция между тяжестью заболевания и степенью угнетения интерфероногенеза. Так, при фульминантном гепатите этот процесс выражен особенно резко. В плазме больных гепатитом В присутствуют факторы, ингибирующие образование интерферона, которые постепенно исчезают в процессе реконвалесценции.

При хроническом персистирующем и активном гепатитах В и D также отмечено снижение продукции эндогенного интерферона и способности лейкоцитов и лимфоцитов продуцировать альфа- и гамма-интерфероны после их стимуляции вирусами in vitro.

Разработка методов получения лейкоцитарного и рекомбинантного интерферона в препаративных количествах, а также высокоэффективных методов их очистки открыла возможность применения этих препаратов в лечении вирусных гепатитов.

В настоящее время как у нас в стране, так и за рубежом выпускаются коммерческие препараты: человеческий лейкоцитарный, лимфобластный “Велферон” (Wellferon), фибробластный (Ферон); интерферон и интерфероны, полученные генно-инженерными методами: рекомбинантные альфа-(Реоферон, Реальдерон и другие), бета- и гамма-интерферон (Гаммаферон).

Механизм терапевтического действия интерферона при лечении гепатитов окончательно не определен. Считается, что при гепатите В интерферон, кроме угнетения репродукции вируса гепатита В , стимулирует ряд иммунных механизмов при участии антигенов главного комплекса гистосовместимости, что повышает эффективность иммунологического распознавания и цитолиза гепатоцитов, зараженных вирусом гепатита В.

Кроме применения интерферона в качестве лечебного препарата проводятся исследования и по его использованию как иммуномодулятора для усиления антительного ответа при введении вакцины против гепатита В.

ИНФЕКЦИЯ - состояние, когда в организм (или в часть организма) внедряется чужеродный агент (бактерия, грибок или вирус), который размножается и производит болезнетворный эффект (активная инфекция). В отношении ВИЧ: инфицирование, как правило, происходит, когда ВИЧ встречается с клеткой - Т-лимфоцитом (CD4+). Белок gp120, находящийся на поверхности вируса, прочно связывается с молекулой CD4 на поверхности Т-лимфоцита. Происходит слияние мембран клетки и вируса - этим процессом управляет другой белок вирусной оболочки, gp41. После этого ядро вируса, содержащее вирусную РНК, белки и энзимы, проникает внутрь клетки.